Merna Abou Selima

Die zuf llige Integration des IVET-Vektors in das Erregerchromosom erfolgt durch Insertions-Duplikations-Mutagenese, um einen Pool von rekombinanten Erregern zu schaffen (das bedeutet, dass das Gen, in das der Vektor durch homologe Rekombination eingef gt wurde, nicht gest rt wird). Die Rekombinanten k nnen mit Hilfe der Antibiotikaresistenz selektiert werden, da sich ein zus tzlicher Marker auf dem integrierten IVET-Konstrukt befindet. Die gepoolten Klone werden dann in die Maus geimpft. Die beiden Haupttypen von IVET-Promotorenfallen-Strategien sind (a) die Komplementierung der auxotrophen Mutation und (b) die Expression der Antibiotikaresistenz. Nur die Bakterien, die den selektiven Marker enthalten, der mit einem Gen fusioniert ist, das im Wirt transkriptionell aktiv ist, k nnen berleben. Nach einer geeigneten Infektionszeit werden Bakterien, die den Marker exprimieren, aus Lungen-, Leber-, Milz- und Mesenterialgewebe isoliert.

L'int gration al atoire du vecteur FIVE dans le chromosome de l'agent pathog ne est r alis e par mutagen se insertion-duplication afin de cr er un pool d'agents pathog nes recombinants (ce qui signifie que le g ne dans lequel le vecteur s'est ins r par recombinaison homologue n'est pas perturb ). Les recombinants peuvent tre s lectionn s l'aide de la r sistance aux antibiotiques, tant donn qu'un marqueur suppl mentaire se trouve galement sur la construction IVET int gr e. Les clones regroup s sont ensuite inocul s la souris. Les deux principaux types de strat gies de pi ge promoteur FIVETE sont (a) la compl mentation de la mutation auxotrophe et (b) l'expression de la r sistance aux antibiotiques. Seules les bact ries qui contiennent le marqueur s lectif fusionn un g ne transcriptionnellement actif dans l'h te sont capables de survivre. Apr s une p riode d'infection appropri e, les bact ries qui expriment le marqueur sont isol es du poumon, du foie, de la rate et du tissu m sent rique.

A integra o aleat ria do vetor IVET no cromossoma do agente patog nico realizada por mutag nese de inser o-duplica o para criar um conjunto de agentes patog nicos recombinantes (o que significa que o gene no qual o vetor foi inserido por recombina o hom loga n o interrompido). Os recombinantes podem ser seleccionados utilizando a resist ncia aos antibi ticos, uma vez que um marcador adicional se encontra tamb m na constru o IVET integrada. Os clones agrupados s o ent o inoculados no ratinho. Os dois principais tipos de estrat gias de armadilha do promotor IVET s o (a) a complementa o da muta o auxotr fica e (b) a express o da resist ncia a antibi ticos. Apenas as bact rias que cont m o marcador seletivo fundido com um gene que transcricionalmente ativo no hospedeiro s o capazes de sobreviver. Ap s um per odo de infe o adequado, as bact rias que expressam o marcador s o isoladas do pulm o, f gado, ba o e tecido mesent rico.

L'integrazione casuale del vettore IVET nel cromosoma del patogeno viene eseguita mediante mutagenesi inserzionale-duplicativa per creare un pool di patogeni ricombinanti (ci significa che il gene in cui il vettore si inserito per ricombinazione omologa non viene interrotto). I ricombinanti possono essere selezionati utilizzando la resistenza agli antibiotici, poich un marcatore aggiuntivo presente anche sul costrutto IVET integrato. I cloni in pool vengono poi inoculati nel topo. I due tipi principali di strategie di trappola del promotore IVET sono (a) la complementazione della mutazione auxotrofica e (b) l'espressione della resistenza agli antibiotici. Solo i batteri che contengono il marcatore selettivo fuso con un gene trascrizionalmente attivo nell'ospite sono in grado di sopravvivere. Dopo un adeguato periodo di infezione, i batteri che esprimono il marcatore vengono isolati da polmoni, fegato, milza e tessuto mesenterico.